DNA hoặc axit deoxyribonucleic là phân tử mã hóa thông tin di truyền ở hầu hết các sinh vật sống. Một số vi khuẩn sử dụng RNA cho mã di truyền của chúng, nhưng bất kỳ sinh vật sống nào khác sẽ hoạt động như một nguồn DNA cho dự án này. Thật dễ dàng để trích xuất và cô lập DNA mà sau đó bạn có thể sử dụng cho các thí nghiệm tiếp theo.
vật liệu tách chiết DNA
Mặc dù bạn có thể sử dụng bất kỳ nguồn DNA nào, nhưng một số hoạt động đặc biệt hiệu quả. Đậu Hà Lan, chẳng hạn như đậu xanh khô, là một lựa chọn tuyệt vời. Lá rau bina, dâu tây, gan gà và chuối là những lựa chọn khác. Không sử dụng DNA từ người sống hoặc vật nuôi, như một vấn đề đạo đức đơn giản. Đảm bảo rằng mẫu của bạn thực sự chứa một lượng lớn DNA. Xương, răng hoặc vỏ cũ bao gồm hầu hết các khoáng chất và chỉ có dấu vết của vật liệu di truyền.
- 100 ml (1/2 cốc) nguồn DNA
- 1 mL (⅛ muỗng cà phê) muối ăn, NaCl
- 200 ml (1 cốc) nước lạnh
- Enzyme làm biến tính protein (ví dụ: chất làm mềm thịt, nước ép dứa tươi hoặc dung dịch rửa kính áp tròng)
- 30 ml (2 muỗng canh) nước rửa chén dạng lỏng
- Cồn tẩy rửa 70-90% hoặc cồn isopropyl hoặc etylic khác
- Máy xay
- lọc
- cốc hoặc bát
- Ống nghiệm
- Ống hút gỗ hoặc que xiên
Thực hiện trích xuất DNA
- Trộn 100 ml nguồn DNA, 1 ml muối và 200 ml nước lạnh. Quá trình này mất khoảng 15 giây ở cài đặt cao. Bạn đang tìm kiếm một hỗn hợp dày đồng nhất . Máy xay phá vỡ các tế bào, giải phóng DNA được lưu trữ bên trong.
- Đổ chất lỏng qua lưới lọc vào một thùng chứa khác. Mục đích của nó là để loại bỏ các hạt rắn lớn. Giữ chất lỏng; loại bỏ các chất rắn.
- Thêm 30 ml chất tẩy lỏng vào chất lỏng. Khuấy hoặc lắc chất lỏng để trộn nó. Để dung dịch này phản ứng trong 5-10 phút trước khi tiến hành bước tiếp theo.
- Thêm một nhúm nhỏ chất làm mềm thịt hoặc một ít nước ép dứa hoặc dung dịch làm sạch kính áp tròng vào mỗi lọ hoặc ống. Lắc nhẹ các nội dung để kết hợp enzyme. Lắc mạnh sẽ phá vỡ DNA và khiến nó khó nhìn thấy hơn trong vật chứa.
- Nghiêng từng ống và đổ rượu xuống thành của mỗi ly hoặc nhựa để tạo thành một lớp nổi trên chất lỏng. Cồn nhẹ hơn nước nên sẽ nổi trong chất lỏng, nhưng bạn không muốn đổ cồn vào ống vì sẽ hòa trộn sau. Nếu bạn kiểm tra mặt phân cách giữa rượu và từng mẫu, bạn sẽ thấy một khối dạng sợi màu trắng. Đây là DNA!
- Sử dụng xiên gỗ hoặc ống hút để bắt và thu thập DNA từ mỗi ống. Bạn có thể kiểm tra DNA dưới kính hiển vi hoặc kính lúp hoặc đặt nó trong một hộp nhỏ chứa cồn để bảo quản an toàn.
Làm thế nào nó hoạt động
Bước đầu tiên là chọn một nguồn chứa nhiều DNA. Mặc dù bạn có thể sử dụng DNA từ bất kỳ đâu nhưng những nguồn có nhiều DNA cuối cùng sẽ tạo ra nhiều sản phẩm hơn. Bộ gen của con người là lưỡng bội , nghĩa là nó chứa hai bản sao của mỗi phân tử DNA. Nhiều loài thực vật chứa nhiều bản sao vật liệu di truyền của chúng. Ví dụ, dâu tây là thể bát bội và chứa 8 bản sao của mỗi nhiễm sắc thể.
Việc trộn mẫu sẽ phá vỡ các tế bào để bạn có thể tách DNA khỏi các phân tử khác. Muối và chất tẩy có tác dụng loại bỏ các protein thường liên kết với DNA. Chất tẩy rửa cũng tách lipid (chất béo) ra khỏi mẫu. Enzyme được sử dụng để cắt DNA. Tại sao bạn muốn cắt nó? DNA được gấp lại và quấn quanh protein, vì vậy nó phải được giải phóng trước khi có thể phân lập.
Khi bạn đã hoàn thành các bước này, DNA sẽ được tách ra khỏi các thành phần khác của tế bào, nhưng bạn vẫn cần lấy nó ra khỏi dung dịch. Đây là lúc rượu phát huy tác dụng. Các phân tử khác trong mẫu sẽ hòa tan trong rượu, nhưng DNA thì không. Khi bạn đổ rượu (càng lạnh càng tốt) vào dung dịch, phân tử DNA sẽ kết tủa ra ngoài để bạn có thể nhặt nó lên.
nguồn
- Elkins, KM (2013). “Trích xuất DNA”. Sinh học Pháp y DNA . P. 39–52. doi:10.1016/B978-0-12-394585-3.00004-3. ISBN 9780123945853.
- Miller, DN; Bryant, JE; Madsen, EL; Ghiorse, WC (tháng 11 năm 1999). “Đánh giá và tối ưu hóa các quy trình tách chiết và tinh sạch DNA đối với các mẫu đất và trầm tích”. Ứng dụng và Vi sinh Môi trường . 65(11): 4715–24.
